One Lambda ООО «Лабораторная Диагностика» 
Официальный дистрибьютор One Lambda 

 

 

/ Каталог / Трансплантология / HLA-типирование / Наборы реагентов и расходные материалы для HLA-генотипирования

Реагенты для SSP-типирования (Micro SSP™)

Реагенты для SSP-типирования

Реагенты Micro SSP™ - это линия тестов для HLA-типирования с использованием специфических праймеров (SSP), включающая тесты низкого разрешения (Generic), тесты высокого разрешения (High Resolution), аллель-специфичные тесты (Allele Specific), тесты для определения одной аллели (Singles) и тесты для прояснения неоднозначных результатов серологического типирования (Seramates).

Преимущества технологии Micro SSP® от компании One Lambda

  • получение результата типирования менее, чем за 2 часа;
  • генотипирование с высоким и низким разрешением;
  • широкий спектр определяемых аллелей (полный список см. ниже);
  • праймеры уже внесены в лунки планшета;
  • все реагенты набора готовы к использованию;
  • внутренний контроль в каждой лунке планшета;
  • минимальный расход гелей.

Содержание наборов Micro SSP®

Наборы Micro SSP® включают специфичные праймеры для амплификации ДНК-локусов HLA-аллелей и человеческого гена β-глобина (внутренний контроль) методом ПЦР. Оптимизированные наборы праймеров внесены (в сухом виде) в ячейки 96-луночного микропланшета и готовы для добавления образцов ДНК, Taq-полимеразы с dNTP и буферного раствора (Micro SSP D-mix). Наборы выпускаются в 96-луночном (рекомендуется использовать любой 96-луночный амплификатор) и 384-луночном форматах (требуется амплификатор с термоблоком 384-well).

Чем Micro SSP® отличается от стандартной технологии SSP?

Micro SSP® от One Lambda - это полностью оптимизированная технология генотипирования на основе ПЦР: помимо реагентной базы (5 типов тестов) разработаны специальные системы - для переноса 96 образцов в гель одним движением и электрофореза с коротким временем пробега образцов.

система для электрофореза MicroSSP электрофореграмма

Специально разработанная система для электрофореза с камерой небольшого размера позволяет существенно экономить реактивы: для анализа 96 образцов Вам необходимо 30 мл агарозного геля и 10 мл ТВЕ-буфера (в 200 раз меньше, чем при использовании стандартной камеры на 96 образцов). Однозначный результат (да/нет) уже через 3 минуты!

По сравнению с использованием обычной камеры для электрофореза Вы можете сэкономить до 180 000 рублей в год (при проведении 1 электрофореза в день с использованием агарозы Lonza SeaKem®).

Одно из главных преимуществ системы для электрофореза Micro SSP® - простая интерпретация результатов анализа. Вам не нужно сопоставлять продукты амплификации и полосы пробега - однозначный результат типирования (наличие/отсутствие продукта ПЦР) за 3 минуты.

устройство для переноса 96-well Transfer Device

Уникальная разработка компании One Lambda - устройство для быстрого переноса 96 образцов из планшета в агарозный гель. Дозатор на 96 образцов позволяет наносить все пробы с планшета в гель одним движением!

  • высокая точность нанесения - ошибки при нанесении образцов в гель исключены благодаря специальному трафарету для выравнивания;
  • надежность конструкции - иглы выполнены из нержавеющей стали и легко моются;
  • возможность калибровки дозатора.

Использование наборов Micro SSP® в 384-луночном формате

Для увеличения производительности генотипирования Вам доступны наборы Micro SSP® в 384-луночном формате. Специально для работы с 384-луночными микропланшетами компания One Lambda разработала устройство, облегчающее загрузку образцов в планшет - 384 LOAD TEMPLATE, а также набор трафаретов для переноса продуктов ПЦР из 384-луночного планшета в гель - Well Identification Templates. Данные устройства значительно упрощают работу оператора и существенно сокращают время получения результатов генотипирования методом Micro SSP®.

Принцип метода SSP

Метод SSP основан на более эффективном взаимодействии праймеров с ДНК (с последующей амплификацией) при их полной комплементарности, чем при частичном несовпадении. Праймеры подобраны так, что эффективно связываются только с одной аллелью (или с группой аллелей). В процессе ПЦР амплифицируется только полностью комплементарная праймерам ДНК-мишень (позитивный результат). При частичном несовпадении праймеров и ДНК-мишени результаты типирования негативные (амплификации продукта не происходит).

После ПЦР амплифицированные фрагменты ДНК разделяют в агарозном геле. Интерпретация результатов HLA-типирования сводится к однозначному да/нет - присутствие или отсутствие продуктов ПЦР. Поскольку на ПЦР могут негативно влиять различные факторы (ошибки при внесении реагентов, низкое содержание ДНК-мишени в начальной пробе, присутствие ингибиторов и другие), в каждую пробу включен внутренний контроль. Праймеры внутреннего контроля комплементарны консервативному участку человеческого гена β-глобина, присутствующего во всех образцах ДНК человека.

Амплифицированные фрагменты HLA-локусов меньше, чем внутренний контроль, но больше, чем свободные праймеры. Таким образом, позитивные результаты амплификации HLA аллелей или групп аллелей визуализируются в агарозном геле между ДНК внутреннего контроля и свободными праймерами.

Процедура метода SSP

добавление полимеразы и ДНК образца внесение смеси в планшет  проведение амплификации   проведение электрофореза анализ результатов SSP 
Добавить Taq-полимеразу и
ДНК в пробирку с D-mix
Перенести смесь из
пробирок в планшет
Провести ПЦР Провести электрофорез Анализ результатов 

 

Micro SSP Allele Coverage

Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru
© ООО «Лабораторная Диагностика» 
© One Lambda, Inc.